口腔上皮细胞临时装片制作步骤关键是什么？

摘要： 实验原理口腔上皮细胞位于口腔内壁表面，属于动物细胞，其基本结构包括细胞膜、细胞质和细胞核，由于动物细胞没有细胞壁，因此它非常薄、脆弱且透明，为了在显微镜下清晰地观察到它的形态结构,...

实验原理

口腔上皮细胞位于口腔内壁表面，属于动物细胞，其基本结构包括细胞膜、细胞质和细胞核，由于动物细胞没有细胞壁，因此它非常薄、脆弱且透明，为了在显微镜下清晰地观察到它的形态结构,我们需要：

1. 将细胞展平：避免细胞重叠,以便观察单个细胞。
2. 保持细胞活性：在制作过程中尽量减少对细胞的损伤。
3. 增加反差：细胞无色透明，在显微镜下难以分辨，需要使用碘液等染色剂，使细胞的结构（主要是细胞核）颜色变深,从而与周围环境形成对比。

实验材料与用具

• 材料：
  • 清水（最好是凉开水或生理盐水，0.9% NaCl溶液，以维持细胞正常形态,避免过度吸水胀破）
  • 碘液（或亚甲基蓝等染色剂）
  • 消毒牙签
• 用具：
  • 显微镜
  • 载玻片
  • 盖玻片
  • 滴管
  • 吸水纸
  • 镊子

制作步骤（详细图解版）

这个过程可以概括为八个字：“滴、刮、涂、盖、染、吸、观、收”。

第1步：滴

在洁净的载玻片中央，滴一滴9%的生理盐水（或凉开水）。

• 关键：液体不宜过多，以刚好覆盖盖玻片下沿为宜，避免溢出，使用生理盐水比用清水更好，可以维持细胞渗透压稳定,防止细胞吸水涨破或失皱。

第2步：刮

用消毒牙签的宽平端，在自己口腔内壁（脸颊内侧）轻轻地、平缓地刮几下。

• 关键：
  • 动作要轻柔，不要用力过猛,以免损伤口腔黏膜。
  • 刮取物是脱落的口腔上皮细胞,不是食物残渣。
  • 可以在几个不同位置轻轻刮取,以获得更多细胞。

第3步：涂

将牙签上附着的白色碎屑（即刮取的细胞），在载玻片的液滴中涂抹、均匀散开。

• 关键：涂抹要均匀，目的是将细胞打散，避免细胞重叠成团,影响后续观察。

第4步：盖

用镊子夹起盖玻片，使其一边先接触载玻片上的液滴，然后缓缓放下,盖在液滴上。

• 关键：这是最容易出现气泡的一步！
  • 正确方法：让盖玻片先接触液滴边缘，液体因毛细作用会沿盖玻片下缘散开，然后缓缓放下,这样可以最大限度地排出气泡。
  • 避免气泡：气泡在显微镜下看起来是圆形、边缘发亮、内部黑暗的,会挡住细胞。

第5步：染

在盖玻片的一侧，滴加1-2滴碘液。

• 关键：
  • 碘液是染色剂，可以使细胞核染成深黄色或棕黄色,便于观察。
  • 滴加在盖玻片边缘即可。

第6步：吸

在盖玻片的另一侧，用吸水纸吸引，使碘液通过盖玻片与载玻片之间的缝隙扩散并染色整个标本。

• 关键：
  • 吸水纸要紧贴盖玻片另一侧的边缘。
  • 染色时间不宜过长（约30秒到1分钟），否则会使细胞颜色过深，结构模糊不清，当液体从另一侧被吸走,说明染色完成。

第7步：观

将制作好的临时装片放在显微镜下进行观察。

• 关键：
  • 先用低倍镜（10×）寻找：转动粗准焦螺旋，找到物镜与装片的距离接近时，再用眼睛注视目镜，同时反方向转动粗准焦螺旋，直到看清物像,找到细胞分布均匀的区域。
  • 再用高倍镜（40×）观察：将目标细胞移至视野中央，转动转换器换上高倍物镜，通常只需稍微调节细准焦螺旋即可使物像清晰。
  • 观察结构：寻找并识别细胞膜（细胞轮廓）、细胞质（半透明胶状物）和细胞核（被染成深色的圆形或椭圆形区域）。

第8步：收

实验结束后，将用过的载玻片和盖玻片清洗干净，并妥善存放,牙签等废弃物放入指定垃圾桶。

常见问题与注意事项

1. 为什么看不到细胞？

   • 原因1：未染色或染色太浅，细胞是无色透明的,不染色很难看到。
   • 原因2：光线太暗,应调亮显微镜的光源。
   • 原因3：盖玻片下有气泡，挡住了视线，制作时要规范操作,避免产生气泡。

2. 为什么细胞重叠在一起，看不清单个细胞？

   • 原因：刮取后没有在液体中充分涂抹均匀,下次刮取后一定要多涂抹几下。

3. 视野中为什么有很多黑色或灰色的杂质？

   • 原因：口腔没漱干净，或者牙签上混入了食物残渣,实验前最好用清水漱一下口。

4. 为什么细胞颜色过深，结构一团黑？

   • 原因：染色时间过长，碘液滴加后,吸引染色的时间应控制在1分钟以内。

5. 为什么细胞破裂或形态不规则？

   • 原因：使用了清水而不是生理盐水，导致细胞吸水涨破，或者刮取时用力过猛,损伤了细胞。

实验观察要点

在显微镜下,你应该能看到：

• 细胞形态：口腔上皮细胞呈扁平的、不规则的鳞片状或多边形。
• 细胞膜：非常薄，是细胞的边界,勾勒出细胞的轮廓。
• 细胞质：被染成浅黄色,是位于细胞膜和细胞核之间的半透明物质。
• 细胞核：是细胞中颜色最深的部分，呈圆形或椭圆形,通常位于细胞的中央或一侧。

通过这个实验，你可以直观地看到动物细胞的基本结构，并理解制作临时装片的关键技术,祝你实验顺利！